Melhorando uma SARS

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 4690 (2023) Citar este artigo

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Os testes de antígeno de fluxo lateral têm sido amplamente utilizados na pandemia de Covid-19, permitindo resultados de testes diagnósticos mais rápidos e prevenindo uma maior propagação viral através do isolamento de indivíduos infectados. A realização desta triagem deve ser realizada com testes que apresentem sensibilidade satisfatória para detectar com sucesso a proteína alvo e evitar falsos negativos. O objetivo deste estudo foi criar um teste de fluxo lateral que pudesse detectar a proteína do nucleocapsídeo SARS-CoV-2 em baixas concentrações comparáveis ​​aos limites de detecção reivindicados pelos testes existentes no mercado. Para tanto, foram necessários diversos ajustes durante a pesquisa e desenvolvimento dos protótipos até que estes estivessem condizentes com estes critérios. As alternativas propostas de aumento da concentração de anticorpos na linha de teste e adição de uma intermembrana entre a almofada conjugada e a membrana de nitrocelulose foram capazes de aumentar a sensibilidade em quatro vezes e gerar um novo protótipo de teste rápido denominado “teste de imunoensaio intermembrana de fluxo lateral” (LFIIT) . Este protótipo apresentou limite de detecção adequado (2,0 ng mL-1), mantendo a acessibilidade e a simplicidade nos processos de fabricação.

Em dezembro de 2019, vários pacientes foram hospitalizados na cidade de Wuhan, província de Hubei, China, com sintomas respiratórios semelhantes aos da pneumonia de etiologia desconhecida, com estudos subsequentes mostrando evidências convincentes de que o mercado de frutos do mar e vida selvagem de Huanan, em Wuhan, poderia estar relacionado ao surto. O agente causador foi identificado como um betacoronavírus do subgênero sarbecovirus, pertencente à subfamília Orthocoronavirinae, e foi inicialmente denominado 2019-nCoV, que posteriormente seria renomeado como SARS-CoV-21.

Os coronavírus são vírus envelopados de RNA de fita simples de sentido positivo que afetam principalmente o trato respiratório, mas também são capazes de causar efeitos neurológicos, entéricos e hepáticos2,3. Até dezembro de 2019, sabia-se que seis coronavírus infectavam seres humanos, sendo que quatro deles causavam sintomas leves semelhantes aos da gripe, enquanto os outros dois eram responsáveis ​​por epidemias altamente patogênicas: SARS-CoV e MERS-CoV4,5,6. Da mesma forma, em março de 2020, a Organização Mundial da Saúde (OMS) declarou a doença do novo coronavírus (COVID-19) uma pandemia global, causada pelo SARS-CoV-27,8.

O SARS-CoV-2 compartilha 79,5% de similaridade genética com o SARS-CoV e a montagem de partículas virais depende de quatro proteínas estruturais principais: proteínas de membrana (M), nucleocapsídeo (N), envelope (E) e espícula (S), além de proteínas não estruturais e acessórias9,10. O principal método de infecção do SARS-CoV-2 depende da glicoproteína Spike, que apresenta uma estrutura trimérica na superfície do vírus. É composto por duas subunidades: S1 e S2, sendo que S1 possui um domínio de ligação ao receptor (RBD) e é responsável pela ligação à enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2), principal receptor do SARS-CoV-2 nas células hospedeiras11. Por esta razão, a proteína Spike tem sido alvo de grande atenção para pesquisa e desenvolvimento de medicamentos terapêuticos e vacinas para a COVID-1912. No entanto, a proteína Spike é também a proteína estrutural mais afetada por mutações genéticas em diferentes variantes do SARS-CoV-2, o que leva a alterações importantes no reconhecimento de anticorpos, afetando testes diagnósticos e vacinas13. Estudos semelhantes mostraram que a proteína N é muito mais conservada entre variantes e as suas mutações não afectam a ligação de anticorpos em testes de diagnóstico rápido até agora, tornando-a um alvo melhor para testes rápidos do antigénio SARS-CoV-214.

Os testes rápidos oferecem diversas vantagens em relação aos métodos laboratoriais tradicionais que exigem pessoal treinado, equipamentos e demoram mais tempo para obtenção dos resultados15. Além disso, o teste de antígeno tende a se correlacionar bem com o estado de contagiosidade do paciente, revelando-se como uma ferramenta poderosa para isolar os infectados e reduzir a propagação viral, quando comparado aos métodos moleculares16.